蛋白质等电点的名词解释_测定方法

　　蛋白质等电点的名词解释：

　　在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

　　蛋白质等电点的测定方法：

　　方法：平板等电聚焦

　　原理：蛋白质分子在含有载体两性电介质形成的连续而稳定的线性pH梯度中进行电泳。但不自是按照等电点不同被分离。

　　仪器：Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell

　　样品要求：

　　液体：浓度>3mg/ml;体积>200ul;固体：质量>200ug

　　样品纯度>90%;含盐量<3 0mM;分子量：一般要求大于1000Da

　　常见影响测试情况:

　　1、蛋白质纯度不足

　　2、含盐量过高

　　3、蛋白质分子量太小，导致无法固定染色

　　蛋白质等电点的主要应用：

　　在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。在等电点外的所有其他pH值，依据蛋白质所带净电荷采用电泳和离子交换层析来分离和分离纯化该蛋白质。

　　等电点沉淀主要应用于蛋白质等两性电解质的分离提纯，还可应用于大豆异黄酮的分离：用等电点沉淀法脱去蛋白质，可提高异黄酮制品的纯度，异黄酮截留率为7.2%，蛋白质截留率为91.1%。

　　大豆蛋白质在pH4.5左右达到等电点，此时其溶解度最低形成沉淀，利用这个性质来提取大豆分离蛋白，使大豆分离蛋白从提取液中聚沉下来，与其他可溶性物质分离。大豆分离蛋白不是在所有酸性条件下都沉淀，只有在等电点附近才沉淀，当pH调太低时溶解度反而升高，到pH2.5时，已沉淀的蛋白质就会几乎全部重新溶解，因此必须严格掌握酸沉所需的pH，才能有满意的效果。在分离中，大量的含磷化合物的存在是影响蛋白质提取的较大因素，最好除去植酸，可用透析法，也可根据蛋白质和植酸的溶解度的差异性将其除去。

　　大豆分离蛋白的一般工艺是用50℃温水萃取并离心，把豆渣用50℃温水和NaOH调整pH9进行二次萃取，并离心分离把分离出的豆浆进行酸沉，同时搅拌(60r/min)，加入2%消泡剂和温水，加入适量亚硫酸钠调pH7左右，进行高速搅拌(120r/min)并加入3.5%HCL调至pH4.5，此时蛋白质在等电点开始沉淀，并经过一系列的工艺凝乳分离、均质、中和、杀菌干燥得成品。